腦脊液中腦膜癌細胞CEA表達的研究
【摘要】目的:聯合應用免疫熒光細胞化學技術和激光掃描共聚焦顯微鏡技術(LSCM)檢測腦脊液中腦膜癌細胞CEA的表達部位并定量測定其熒光含量，探討該技術在腦膜癌病診斷中的價值。 方法:應用免疫熒光細胞化學法以CEA標記腦膜癌細胞及對照組腦脊液細胞，采用LSCM技術獲得腦膜癌細胞掃描圖像并定量測定CEA熒光強度值。結果:腦脊液中腦膜癌細胞的CEA表達為陽性，且部位在細胞漿中;CEA平均熒光值(36.80±17.17)，與對照組(4.87±1.86)相比差異有統計學意義(P<0.01)。結論:聯合應用免疫熒光細胞化學法和LSCM檢測腦脊液細胞中CEA的表達可為腦膜癌病的診斷提供可靠依據。
【關鍵詞】腦膜癌病;腦脊液;CEA;激光掃描共聚焦顯微鏡;免疫熒光
本調查共同操作免疫抗體熒光細胞膜系物理化學新技術性和繳光掃錨共焦聚顯微新技術性對20例腦膜癌病(meningealcarcinomatosis,MC)病人的腦脊液細胞膜系對其進行淺綠色熒光均勻值(CEA)論文檢測，以淺議該工藝在MC診斷報告中的商業價值。1、材料與方法
1.1 標本來源：20例MC患者為2007年8月至2008年8月本院、南京腦科醫院門診及住院收治。男9例，女11例，平均年齡51歲。按腫瘤來源：肺腺癌10例、乳腺癌2例、絨毛膜癌1例、子宮內膜癌1例、惡性髓母細胞瘤2例、未找到原發病灶4例。16例轉移癌病例均由組織病理證實。對照組20例均為同期本院神經內科住院收治，經腦脊液細胞學診斷為病毒性腦膜炎且隨訪已治愈。男8例，女12例，平均年齡41歲。
1.2 試劑與儀器：兔抗人CEA、FITC-羊抗兔IgG均購自北京博奧森生物技術公司;Cytospin-3型細胞玻片離心儀，英國Shandon公司生產;TCS-SP5型激光共聚焦掃描顯微鏡，德國Leica公司生產，第三軍醫大學提供使用。
1.3 方法
1.3.1 CEA標記：設肺腺癌胸水陽性對照組、PBS自發熒光對照組、PBS+二抗熒光標記物對照組。標本玻片以10%羊血清封閉30min，滴加1∶100兔抗人CEA，置濕盒內37℃孵育1h,4℃過夜，再加入1∶20FITC-羊抗兔IgG,避光置濕盒內37℃孵育1h，滴加1∶1000DAPI室溫10min，甘油封片，以上每步驟間均以0.01MPBS漂洗3遍。
1.3.2 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察：分別用488nm和405nm波長的激光器激發綠色和藍色熒光。CEA相對熒光含量檢測結果以平均熒光值和熒光強度地形立體分布圖表示。實驗組及對照組各隨機選取200個高倍鏡視野的細胞，測定每個細胞內CEA含量的相對熒光值及細胞面積、周長。
1.4 統計學方法：本實驗采用SPSS11.5統計軟件，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。
2、結果
2.1 LSCM掃描熒光圖像及CEA的表達部位：腦膜癌細胞的胞漿內可見分布均勻的綠色熒光，CEA表達于胞漿;其余淋巴、單核細胞等僅見DAPI染色的藍色細胞核，胞漿未著色。對照組腦脊液細胞僅見藍色的細胞核，胞膜、胞漿及胞核內未見綠色熒光，提示無CEA表達
2.2 CEA熒光強度地形立體分布圖：腦膜癌細胞圖像為不規則的蛋糕形，中心凹陷呈火山口狀，底部可見藍色細胞核區域;胞漿區域呈環形，頂端不平坦，黃、紅色山峰呈鋸齒樣突起，相對熒光含量由低到高(0→255)藍→綠→黃→紅。對照組腦脊液細胞地形平坦，僅見藍色腎形細胞核區域，胞漿基本無熒光分布，單核細胞。
2.3 腦膜癌細胞與對照組腦脊液細胞CEA熒光相對含量及形態學參數比較：腦膜癌細胞與對照組腦脊液細胞CEA熒光含量相比差異有統計學意義(P<0.01)，腦膜癌細胞的面積、周長與對照組腦脊液細胞相比差異有統計學意義(P<0.01)。
幾組腦脊液細胞系EMA/CEA熒光相對于成分及性狀學運作的是比較3、討論
MC是猶豫惡意肉瘤在蛛網膜下腔和軟膜內縈繞性轉換而引致的一系類臨床上研究總體征，在腸癌病我們中產生比率為5%-8%，目前為止有回升發展趨勢[1]。非小人體細胞系肺癌、乳腺癌癌、胃消化道癌是腦膜癌常用見的原發灶，腺癌是其注意組建的類型[2]。腦膜癌病臨床上研究突出表現繁瑣，在腦脊液中得到腦膜惡性肉瘤系是評估本病的不可能標準規定[3]。據新聞稿[4]MC病我們初次腰穿看見肉瘤人體細胞系的陽型率僅為45%-60%。 劉振華等[5]消息正常CSF神經組建核學顯示良性肺部腫瘤神經組建核的抵抗能力弱陽率有41.86%，軟件選用CEA免役神經組建核化工法可將抵抗能力弱陽率增長到83.72%。Liu等[6]消息CEA等上皮因素地的圖標物在腦膜癌組的抵抗能力弱陽例數為80%，在良惡性瘤腦膜瘤組為0%，表明多抵抗能力免役組化監測可鑒別方法良性肺部腫瘤神經組建核的組建因素地。本進行實驗性MC組CEA抵抗能力弱陽率有90%(18/20);正常MGG上色的抵抗能力弱陽率60%(12/20)，二者較之不同化有匯總分析學重大意議(P<0.05)，表明免役神經組建核化工上色的可有效增長腦膜癌病的就診率，與內地外探討探討相同。Martínez等[7]軟件選用免役熒光雙標和LSCM技術工藝對腦膜血液外皮神經組建核瘤中的抑癌染色體開始了探討探討。岳劍寧等[8]用LSCM對腦脊液淋疤癌癥神經組建核線粒體開始了立休、按量探討探討。LSCM觀測可看見神經組建核核與DAPI整合呈艷麗的藍熒光，末見有機健康熒光，表明胞核內無CEA體現;胞漿內可看見分布圖制作區區均勻的的艷麗的有機健康熒光，表明CEA體現于胞漿，與內地外消息相同[9]。從熒光強度地形區立休分布圖制作區區圖可看見腦膜癌神經組建核胞核CEA分量非常少，而胞漿內CEA分量較高，亦與上面的分布圖制作區區相不對。對照組神經組建核戶型占地面積和周長相對應比較較小，胞漿內CEA分量很低;而腦膜癌神經組建核戶型占地面積和周長相對應比較過大，胞漿內CEA分量較高，兩列彼此較之不同化有匯總分析學重大意議(P<0.01)。本進行實驗性MC組中2例髓母神經組建核瘤監測CEA弱陽，與論文參考文獻消息相同[10]。【參考文獻】
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