S100A4和Ecadherin在上皮性卵巢腫瘤中的表達及意義
【摘要】目的：研究S100A4蛋白和上皮鈣粘蛋白(Ecadherin，Ecad)在人類上皮性卵巢腫瘤中的表達情況，探討并分析兩者與上皮性卵巢癌的浸潤、轉移發生的關系及其生物學意義。方法：采用免疫組織化學法SP法檢測S100A4蛋白和Ecad在上皮性卵巢腫瘤中的表達與分布，結合臨床病理情況分析兩者與臨床病理參數之間的關系。結果：上皮性卵巢癌中S100A4的表達率比卵巢良性腫瘤和上皮性卵巢交界性腫瘤中的表達率增高(P<0.05);S100A4在上皮性卵巢癌中的表達與組織學分級、有無轉移、有無腹水有關(P<0.05)，與臨床病理分期無關(P>0.05);Ecad在上皮性卵巢癌的表達與臨床分期、有無轉移、有無腹水有關(P<0.05)，而與組織學分級無關(P>0.05);S100A4,Ecad在上皮性卵巢癌中的表達與有無絕經、腫瘤大小、臨床病理類型無關(P>0.05);上皮性卵巢癌中S100A4和Ecad的表達呈負相關(r=-0。385，P<0.05)。結論：S100A4和Ecad的相關表達與上皮性卵巢癌的發生發展關系密切，是判斷上皮性卵巢癌生物學行為、預測侵襲轉移的重要指標。
【關鍵詞】卵巢腫瘤;S100A4;鈣粘著糖蛋白類;腫瘤轉移
引言
侵襲和轉移是惡性腫瘤患者死亡的重要原因，腫瘤的轉移包括細胞骨架的丟失、癌細胞的脫落等過程，此過程與Ecad和轉移相關蛋白S100A4有非常密切的關系。S100A4蛋白是最近從S100蛋白家族篩選的一個與惡性腫瘤預后相關的一個因子①，Ecad分布于細胞細胞黏附連接處，是介導相鄰細胞的同型黏附，其異常表達促使惡性腫瘤的轉移②。我們探討S100A4和Ecad的表達與上皮性卵巢癌的侵襲轉移之間的關系，為臨床上上皮性卵巢癌的診斷治療、預后評估提供依據。
1、材料和方法
1.1 材料
樣本源自安徽省婦幼調理院和渭南市服務中心醫院門診200401/200703技術切掉的上皮性子宮子宮保持持續、自然自然肉瘤48例，均經40g/L甲醛含量特定、傳統脫水處理、包埋。在當中保持持續、自然上皮性子宮子宮保持持續、自然自然肉瘤10例(吸收塔性囊腺瘤6例，分泌物性囊腺瘤4例)，搭界性子宮子宮保持持續、自然自然肉瘤8例(吸收塔性搭界性囊腺瘤5例，分泌物性搭界性囊腺瘤3例)，上皮性子宮子宮癌30例(吸收塔性子宮子宮癌18例，分泌物性子宮子宮癌12例)，在子宮子宮癌我們中，整個我們進行項目均無放療化療放療史，無毒害酒毒素沾染史，無癌癥晚期大家族史，，并按照全國婦產科醫生連盟(FIGO)2000年規格規范，在當中Ⅰ期6例，Ⅱ期8例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例;組織性機構學等級分類：按WHO等級分類規格規范：在當中Ⅰ級10例，Ⅱ級8例，Ⅲ級12例，并取的同時期技術因其余保持持續、自然疾病癥狀而切掉的正常的子宮子宮組織性機構6例，整個我們年歲在30~69歲之前。1.2 方法
S100A4多克隆抗體和EcadmAb購自北京中杉生物技術公司，組化染色按SP試劑盒提供的說明書進行，中杉公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗行陰性對照。每張切片隨機選擇5個高倍視野，采用半定量計分法判定結果。Ecad以胞膜呈黃色或棕黃色為陽性細胞，按陽性細胞所占比例③④計算陽性細胞百分數，膜著色連續清楚且陽性細胞數>75%定義為4分，著色淡不連續且陽性細胞數50%～75%定義為3分，陽性細胞數25%～50%定義為2分，陽性細胞數<25%為1分，著色為棕黃色為3分，著色為黃色為2分，著色為淡黃色為1分，基本不著色為0分，>10%的細胞質或胞核出現棕黃色顆粒定義為異位表達，將每張切片平均著色程度得分與平均著色細胞百分率得分相乘為其最后得分，總分≥6者為陽性表達，總分<6者為膜表達減弱，膜表達減弱或異位表達統一定義為陰性表達。S100A4的染色結果判定：S100A4以胞質或胞核出現黃色顆粒為陽性細胞，高倍鏡下將陽性細胞數<10%為1分，陽性細胞數在10%~50%為2分，陽性細胞數>50%為3分，將<3分者為S100A4陰性表達，等于3分為陽性表達。
1.3統計學處理：采用統計學軟件SPSS11.5進行分析，樣本率的比較用χ2檢驗或Fisher確切概率法，S100A4與Ecad表達的相關性分析用Spearman等級相關法，P<0.05為有統計學意義。
2、結果
2.1 S100A4及Ecad在正常卵巢組織和上皮性卵巢腫瘤中的表達 S100A4在胞質中表達，Ecad在胞膜中表達，且都在相應部位呈棕黃色或棕褐色。S100A4和Ecad在正常卵巢組織無表達，Ecad表達從良性組、交界性組、惡性組呈逐漸減低的趨勢，而S100A4呈現逐漸升高的趨勢，惡性組分別與良性組交界性組間有統計學差異(P<0.05)。S100A4和Ecad在上皮性卵巢腫瘤中的表達
2.2 S100A4，Ecad的表達與上皮性卵巢癌臨床病理參數的關系S100A4的表達 與組織分化、有無腹水、轉移有關(P<0.05);而與其他參數無關(P>0.05);組織分化越低，S100A4的表達越高(P<0.05);雖然S100A4在晚期卵巢癌的表達比早期卵巢癌增高，但無統計學意義(P>0.05);Ecad的表達與臨床分期、有無轉移以及有無腹水有關(P<0.05,S100A4和Ecad表達與上皮性卵巢癌臨床病理參數的關系
2.3 S100A4和Ecad表達的相關性 30例上皮性卵巢癌組織中S100A4陽性表達和Ecad陰性表達的共有15例，相關性分析結果顯示，卵巢癌組織中S100A4和Ecad的表達呈負相關(r=-0.385，P<0.05)。
3、討論
S100A4是一個與惡性腫瘤侵襲、轉移等病理過程密切相關的蛋白，Kerisebilck等⑤報道S100A4基因轉染小鼠乳腺細胞系后，細胞Ecad基因的表達減低，且細胞中catenin分布狀態發生紊亂，使Ecad不能正常介導同型細胞間的黏附，腫瘤細胞易脫離母體腫瘤而發生轉移。S100A4蛋白以共價鍵二聚體和非公價鍵二聚體存在于體內，以共價鍵二聚體存在于細胞間質中的S100A4蛋白的存在是細胞間信號傳導，細胞與細胞基質相互作用的基礎，也是腫瘤細胞侵襲和轉，也是腫瘤細胞侵襲和轉移的病理基礎①。Cho等⑥研究發現S100A4的表達與結直腸癌的腫瘤分期及淋巴結轉移率密切相關，但與腫瘤的定位、大小及患者的生存時間無關。隨后對癌組織進行S100A4基因突變的檢測，結果無S100A4基因突變的存在。
Jenkinson等⑦研究發現S100A4蛋白的表達與細胞的異常增生及腫瘤的發生、發展有關。本試驗研究結果顯示S100A4的陽性表達與臨床分期無關，雖然有報道S100A4在肺癌、結直腸癌的表達與臨床分期有關，但與Kikuchi等④的研究結果一致，而且在Kikuchi的研究中發現對于同一期別的卵巢癌患者，S100A4在胞核的表達越高，與無胞核表達的組織相比，患者的生存期明顯縮短，特別是對于Ⅰ/Ⅱ期的卵巢癌患者。
現有研究表明Ecad表達變化可能與以下機制有關，如Ecad基因突變，基因啟動子的甲基化，基因啟動子上單個核苷酸的多態性以及腫瘤部位的蛋白酶活性升高等⑧。本研究證實正常卵巢上皮細胞不表達Ecad，而在卵巢良性腫瘤中Ecad表達增高，可能Ecad在卵巢新生物的形成及向惡性發展過程中行使某種功能⑨。本研究中我們發現Ecad的陽性表達與臨床分期有關，分期為Ⅰ,Ⅱ期者表達高于Ⅲ,Ⅳ期，表明Ecad與腫瘤的浸潤、轉移有關。Ecad表達下調將使同種細胞失去黏附，正常組織不能發育成形。對于惡性腫瘤而言則細胞極性喪失、呈現惡性細胞形態并具備侵襲性生長的特性。當Ecad活性正常瘤細胞不易從原發灶上脫落下來，而當Ecad失活導致細胞間黏附作用下降和極性紊亂，促使腫瘤的轉移⑩。研究發現，在膀胱癌、肺癌、腎癌、大腸癌等大多數腫瘤中均有Ecad的表達減弱或缺失，且與腫瘤的臨床分期，組織分化、浸潤轉移及復發有密切關系，是預示腫瘤進展及預后的重要指標之一⑾，本試驗中我們發現分化程度低者，Ecad的陽性表達也偏低，但無統計學意義，可能與我們的結果判斷標準不同有關。我們研究發現Ecad在惡性腫瘤中部分在胞質表達可能是無功能的Ecad經蛋白水解，產物釋放入胞質所致。雖然S100A4和Ecad的表達呈負相關有待進一步研究，但S100A4可能通過肌動蛋白細胞骨架動力促進細胞運動，引起Ecad表達下調，使其不能介導同種細胞的黏附，使腫瘤細胞脫離母體腫瘤而發生轉移⑿。
近些年對S100A4蛋清酶與淋巴惡性良性癌癥微生理學攻擊行為的理論探究已由于強調，其在很多淋巴惡性良性癌癥的理論探究已接二連三開發，顯然S100蛋清酶促淋巴惡性良性癌癥會出現提升使用的基本機能從未徹底揭示，有待于進一步驟理論探究。S100A4蛋清酶和Ecad的的關聯增進，很有可能成為診斷淋巴惡性良性癌癥效果的一指數公式，為指引藥學治愈帶來了必然的根據。【參考文獻】
[1]Mazzuccheli L.Protein S100A4: Too Long Overlooked by Pathologists[J]? Am J Pathol,2002,160(1):7-13. [2]Cobanoglu U,Ersoz S,Turgutalp H,et al.Correlation of Ecadherin expression with clinicopathological parameters in breast carcinoma[J].Saudi Med J,2004,25 (8):1024-1027. [3]Kim JC,Roh SA,Kim HC,et al.Coexpression of carcinombryonic antigen and Ecadherin in colorectal adenocarcinoma with liver metastasis[J].J Gastrointest Surg，2003，7(7):931-938. [4]Kikuchi N,Horiuchi A,Osada R,et al.Nuclear expression of S100A4 is associated with aggressive behavior of epithelial ovarian carcinoma:An important autocrine/paracrine factor in tumor progression[J].Jpn Cancer Assoc，2006，97(10):1061-1069. [5]Keirsebilck A,Bonne S,Bruyneel E,et al.Ecadherin and metastasis (mts1/ S100A4) expression levels are inversely regulated in two tumor cell families.Cancer Res,1998,58(20):4587-4591. [6]Cho YG,Kim CJ,Nam SW,et al.Overexpression of S100A4 is closely associated with progression of colorectal cancer [J].World J Gastroerrterol，2005，11 (31):4852-4856. [7]Jenkinson S R,Barraclough R,West C R,et al.S100A4 regulates cell motility and invasion in an in vitro model for breast cancer metastasis [J].Br J Cancer,2004,90(1):253-262. [8]Lee JO,Kwun HJ,Jung JK,et al.Hepatitis B virus X protein represses Ecadherin expression via activation of DNA methyltransferase1 [J].Oncogene, 2005,24(44): 6617-6625. [9]Alper O,Marta L,Santis DE,et al.Anti-sense suppression of epidermal growth factor receptor expression alters cellular proliferation,cell-adhesion and tumorigenicity in ovarian cancer cells1[J].Int J Cancer,2000, 88(4):566-574. [10]Cobanoglu U,Ersoz S,Turgutalp H,et al.Correlation of Ecadherin expression with clinicopathological parameters in breast carcinoma[J].Saudi Med J,2004,25 (8):1024-1027. [11]Zhang S,Ji W,Liu C,et al.The relation of metastasis and prognosis with transforming growth factorbetal and Ecadherin exp ression in sup raglottic larynx squamous cell carcijnoma[J].Linchuang Erbiyanhouke Zazhi, 2006,20 (12):534537. [12]Moriyama Kita M,Endo Y,Yonemura Y,et al.S100A4 regulates Ecadherin expression in oral squamous cell carcinoma[J].Cancer Lett，2005，230(2):211-218.
