MUC蛋白在分泌性中耳炎積液形成中的作用

發布時間：2011/11/25 14:03:46

【摘要】目的：建立細菌及其產生的內毒素誘導大鼠分泌性中耳炎模型，并探討中耳黏膜中分泌型黏蛋白的表達，及其對中耳積液產生和發展造成的影響。方法：20只SD健康大鼠隨機分為對照組(10只)和實驗組(10只);實驗組建立滅活的流感嗜血桿菌引起的分泌性中耳炎模型，在不同時間段以鱟實驗法檢測中耳積液中的內毒素，ELISA法檢測中耳積液中的黏蛋白。對取材黏膜常規染色和APPAS染色，觀察黏液腺、杯狀細胞。結果：實驗組中鼓室上皮黏膜內毒素含量平均值是對照組鼓室上皮黏膜中含量的2.1倍，其平均值差異有顯著性(P<0.05)。ELISA法檢測中耳積液中的黏蛋白，實驗組鼓室上皮黏膜中平均值是對照組中平均值的4.2倍，其平均值差異有顯著性(P<0.05)。結論：細菌的分解產物—內毒素，導致中耳黏膜的炎癥反應及中耳腔滲出，引起杯狀細胞分泌黏蛋白，從而導致產生中耳積液，甚至膠耳。

【關鍵詞】黏蛋白;分泌性中耳炎;內毒素

分泌性中耳炎(OME)是指中耳腔存在積液而不伴有急性感染癥狀或體征的一類疾病。本病好發于兒童，特別是那些頑固性或持續性OME，患兒因聽力障礙可能導致言語發育遲緩、學習障礙及心理、行為異常，因而引起廣泛重視^①。由于OME的發病機制至今尚未完全闡明，因此其治療效果尚難以令人滿意。

如今來說，給予OME的病源是多方面的，涵蓋咽鼓管功能表心理障礙、感柒和變態反應等，但如今對其病源及起病體制還沒有幾乎看不清楚。而口腔粘膜高合成給予的中耳腔展現不要去除的分必物是其最主要的特征英文。本實踐亟需一起探討合成性中耳炎的始動方面，從給予中耳炎通最常見的可致菌開始，科學試驗大腸桿菌下列不屬于誕生的內黑色素咋樣危害中耳口腔粘膜黏血清的合成;蘊含內黑色素和黏血清在合成性中耳炎積液的情況、轉型進程相應起的做用，要怎樣深刻認識到合成性中耳炎的起病體制，為醫學初期醫治具備系統論和實踐措施，為同合成性中耳炎的防范和寶寶聽力方面保障得到好處探秘，為其醫學開展具備新工作思路。

1、資料與方法

1.1 一般資料

的取舍穩定SD大鼠20只，雌雄不拘小節，標準體重200～250mg，電耳鏡檢驗包括但不限于中耳病癥。隨即分類2組，研究組的取舍分秘性中耳炎最易見的致病菌菌——失活的流感癥狀嗜血桿菌，以1%戊巴比妥(30mg/kg)經腹腔針劑麻醉劑后，經鼓膜前以下添加細菌和病毒自動隱藏液0.1mL，針劑前在瓊脂養育基上養育，要確保是沒有活的菌株生長的，謹防吸引發生急性感染支原體;差表組添加等量生理上建議使用淡鹽水配合。

1.2 研究方法

拆線后1，3，7，14，18d用1%苯巴比妥鈉將大鼠全麻，在整形手術光學顯微鏡下關注鼓膜形式、紅顏色和光澤度，以后隨機函數處死兩對中2只大鼠，取單側聽泡，用10%裝修甲醛進行固定后脫鞘，石蠟包埋切塊，基本HE著色的光鏡下關注，取一小片結膜組織機構合閘鏡查看。結膜基本著色的和APPAS著色的，關注分必物腺、杯狀體細胞。在不同于時光段以鱟實驗報告法檢查測量中耳積液中的內毒性，ELISA法檢查測量中耳積液中的黏球蛋白。

1.3 統計學方法

以求算機輔助器三維圖像測試法深入定量分析組織開展學成果。大多數統算定量分析數素材由SPSS13.0平臺對其進行統算定量分析數深入定量分析，檢則技術α=0.05。

2、結果

探究鼓膜事情：正常情況下大鼠的鼓膜剔透，鼓室無積液，錘骨柄和光錐清楚可辨;造模后大鼠的鼓膜發渾，鼓室積液，光錐變大。 果酸換膚1d，APPAS脫色正常人組和比組中耳口腔粘膜鼓岬處由立米或扁形上皮和薄層結締團體(僵板層)分解成，口腔粘膜最上層有少有些玻璃合成氯綸板母上皮組織和出一些膠原玻璃合成氯綸板及堿式鹽多核白上皮組織、淋巴腺上皮組織，光鏡下全部的繪圖組咽鼓管上皮層次框架更多，分沁量物腺狀擴展、種數更多，小動脈強烈腫脹并有堿式鹽粒上皮組織浸泡和不少更多的分沁量上皮組織。果酸換膚1周繪圖組鼓室口腔粘膜上皮上皮組織和杯狀上皮組織強烈炎癥，炎性上皮組織浸泡強烈，電鏡下可以說不少杯狀(分沁量)上皮組織招募，的表面上有微毛毛，上皮組織內有不少非常成熟的亮顆粒狀肥料和出一些暗顆粒狀肥料，有些排放出到口腔粘膜的表面上，呈分離的團狀，上皮上皮組織的內質網擴展，線粒體扭曲，核固縮或整個的上皮組織框架不清，口腔粘膜下孔隙動脈擴展腫脹，強烈炎癥。果酸換膚2周組和4周組出來成玻璃合成氯綸板上皮組織炎癥，有更多玻璃合成氯綸板母上皮組織和膠原玻璃合成氯綸板，再生動脈更多，單核心巨噬上皮組織浸泡，中耳口腔粘膜強烈肥厚，在上皮組織間和口腔粘膜最上層有更多分沁量物上皮組織和分沁量物滴。 剖宮產后1，3，7，14，18d以鱟科學試驗所法監測中耳積液中的內毒物，結局體現 科學試驗所組中內毒物濃度馬上間的增大而增大，差不多值一般選擇(218.0±191.9)μg/106，是較組鼓室上皮口腔粘膜(101.57±653.4)μg/106的2.1倍，其差不多值之間的關系有特殊性(P<0.05)。ELISA法監測中耳積液中的黏核蛋白，科學試驗所組鼓室上皮口腔粘膜中差不多值一般選擇(4918.0±1931.9)μg/106，是較組鼓室上皮口腔粘膜中差不多值(1001.45±263.8)μg/106的4.2倍，其差不多值之間的關系有特殊性(P<0.05)。

3、討論

分泌性中耳炎是耳鼻咽喉科常見病之一，是小兒聽力障礙的主要原因，嚴重影響患兒的語言發育和智力發育。尤其是慢性分泌性中耳炎，病程長，遷延不愈，如不及時治療則易導致鼓膜萎縮、鼓室硬化、慢性中耳炎、膽脂瘤、膽固醇肉芽腫等。其發病與中耳黏膜腺體和杯狀細胞的增生有關，黏膜高分泌引起的中耳腔出現不易清除的黏液是其主要特征^②。黏蛋白是黏液的主要成分，是一種高度糖基化的大分子蛋白質，目前研究認為其高表達與中耳炎發病關系密切。

到目前為止，人體中至少有9種不同的黏蛋白已被確認，按其發現順序命名為MUC1～4，MUC5AC，MUC5B，MUC6～8^③⑧。MUC1，MUC3和MUC4屬于膜結合型黏蛋白;MUC2，MUC5AC，MUC5B和MUC6屬于分泌型黏蛋白;MUC8尚未確定。現已證明MUC2，MUC5AC，MUC5B和MUC6黏蛋白的基因定位于染色體11P15.5，人們認為它們來源于同一原始基因，因此它們具有結構和基因序列的相似性。MCUI定位于染色體1q21～24，MUC3定位于染色體7q22，MUC4定位于3q29，MUC7定位于4q13～21，MUC8定位于12q24.3^⑨。由于黏蛋白基因的激活和滅活具有器官特異性和上皮細胞特異性，因此某種特定的上皮細胞其黏蛋白基因表達模式不同。

從總體看，黏蛋白可被分成兩組：一組為分泌型黏蛋白(MUC2，MUC5B，MUC5AC，MUC6)，它以膠體形式存在于黏膜表面，其基因編碼簇位于11P15染色體上。另一組為膜結合型黏蛋白，存在于上皮細胞的表層，MUC1，MUC3，MUC4均以跨膜形式存在。黏蛋白是由杯狀細胞分泌的，分布在上皮的表面，與細胞黏附、細胞保護、管腔表面潤滑、入侵微生物的捕獲以及腫瘤生物學等有關。黏蛋白多肽骨架的氨基酸序列有以下特點：高度串聯重復氨基酸序列組成的結構域占極高比例;重復單位富含具羥基側鏈的絲氨酸和蘇氨酸;重復單位的兩側(N和C端)富含半胱氨酸。成熟的黏蛋白羥基側鏈糖基化后形成O連接寡糖的糖蛋白;黏蛋白亞單位之間還可以通過半胱氨酸殘基的巰基(HS)側鏈相互作用形成二硫鍵，構成黏蛋白聚合體，使得黏液具有膠狀特點^⑩。其中MUC1，MUC4和MUC5AC的表達始終局限于表面上皮細胞，前兩者(為膜結合型黏蛋白)表達于杯狀和纖毛細胞，MUC5AC只在杯狀細胞表達。

內毒素是細菌死亡時釋放出的一種具有生物活性的物質。它的主要成分為脂多糖，能引起中耳黏膜結締組織增生，細胞密度增大，毛細血管通透性增高，腺體及杯狀細胞分泌增加，破壞正常黏膜運轉系統，促進中耳積液的蓄積，導致分泌性中耳炎遷延不愈。Yanagihara等^⑾報道，向大鼠氣管內滴入綠膿假單胞菌內毒素，引起大量的中性粒細胞募集和廣泛的氣道上皮細胞表型的改變，即有大量的黏液細胞的增生與化生，MUC5ACmRNA表達和蛋白分泌均增高。此外內毒素也可經過經典途徑及替補途徑激活補體，使嗜堿性粒細胞或肥大細胞釋放組織胺、5羥色胺、激肽和其他血管活性介質作用于靶細胞，從而引起血管擴張，毛細血管通透性增加，同時趨化因子能吸引白細胞向炎癥病灶部位聚集，促進吞噬。在發揮吞噬作用的過程中，釋放溶酶體酶等生物活性物質，除破壞抗原性異物外，同時也可損傷鄰近組織和加劇炎癥，參與分泌性中耳炎的發病。本研究表明：細菌感染引起的分泌性中耳炎中，鼓室黏膜內毒素的含量及杯狀細胞明顯增多，黏蛋白的分泌也明顯增加。這與上述文獻相符，說明內毒素可能是導致分泌性中耳炎出現黏性滲液的始動因素;在急性中耳炎發展為慢性分泌性中耳炎過程中，中耳積液與內毒素和黏蛋白含量存在某種關聯。由此推斷，針對某一特定時期使用降解內毒素的藥物，可以提高機體對內毒素耐受力的糖皮質激素類藥物，有助于減輕內毒素對中耳黏膜的損害，并消除中耳滲液。抗流感嗜血桿菌抗體對流感嗜血桿菌引起的中耳炎可能具有保護作用。

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