子宮腺肌病患者誘生型一氧化氮合酶表達的研究

發布時間：2011/11/15 14:23:22

【關鍵詞】子宮腺肌病;子宮內膜;誘生型一氧化氮合酶;免疫組織化學

子宮腺肌病是婦科常見病，以在子宮肌壁內出現子宮內膜腺體和間質為其病變征，此病多發生于30～50歲經產婦，臨床上往往以子宮增大、痛經和月經過多為其主要癥狀。近年來對該病的發生機制提出一些新的看法，關于血管生成、免疫等方面的異常在子宮腺肌病的發生發展中起重要作用。子宮內膜侵入子宮肌層后，血管生成活性的增強，為異位內膜的種植生成提供了有利條件。NO可誘導血管內皮細胞^①的分裂增生，調節血管生成及血流量，由此推測可在子宮腺肌的發生發展中發揮作用。所以本研究用免疫組化的方法，測定子宮腺肌病患者在位內膜與異位內膜誘導型一氧化氯合酶(iNOS)的含量，旨在探討其在子宮腺肌病的發生發展過程中所起的作用和意義，為臨床治療提供理論依據。

1、資料與方法

1.1 標本 來源材料均取本院2006年9月—2008年3月手術切除并有完整臨床資料的子宮標本，腺肌病組:子宮腺肌病38例，患者年齡35～49歲，平均年齡38.9歲;子宮內膜組織學分期:增生期20例，分泌期18例。肌瘤組:無癥狀子宮肌瘤31例，38～51歲，平均年齡43.2歲;子宮內膜組織學分期:增生期17例，分泌期14例兩組患者術前3個月內均未服用任何激素類藥物。所有病例均行子宮全切或次全切除術，并經病理診斷證實。即用型SABC免疫組織化學染色試劑盒(產品編號:SA1022)為武漢博士德生物工程有限公司產品。

1.2 方法 石蠟切片常規二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，PBS液洗5min,3%H2O25min,PBS洗5min;10%山羊血清室溫10min;一抗(1∶50)，冰箱4℃過夜，PBS洗5min;二抗(1∶150)37℃溫箱30min,PBS洗5min;SABC30min,PBS洗5min;DAB顯色5min,自來水沖洗;蘇木素復染，脫水透明，封片。

1.3 結果 判定結果判斷標準^②以細胞漿出現黃色顆粒為陽性，表達強度用組織學評分表示。組織學評分為ΣPi，其中i代表細胞漿染色強度，分為4級:0級無黃色顆粒，1級為淡黃色顆粒，2級為黃色顆粒，3級為棕色顆粒;P代表同一染色強度細胞所占計數細胞百分數，1、2、3、4、5分別代表染色細胞占計數細胞總數的0%～15%、16%～50%、51%～85%、86%～95%、96%～100%。每張切片隨機測定5個高倍鏡視野(200倍)的染色強度，取5個視野的組織學評分均值作為最終得分。

1.4 統計學處理 實驗結果用x±s表示，采用方差分析和兩兩比較t檢驗，P<0.05為有顯著性差異。

2、結果

iNOS在很正常或異位內膜腺上皮都是有的呈弱陽傳達出來，一組的血管壁平整肌也是有呈弱陽傳達出來，而在間質受損上皮細胞及卵巢平整肌受損上皮細胞均少許呈弱陽傳達出來。

2.1 腺肌病組在位子宮內膜與肌瘤組子宮內膜iNOS組織學評分比較 腺肌病組增殖期或分泌期子宮內膜與肌瘤組比較，腺上皮iNOS組織學評分無明顯變化，兩組比較，差異無顯著性(P>0.05)。同時，兩組子宮內膜腺上皮的增殖期和分泌期iNOS組織學評分比較，差異無顯著性(P>0.05)，即無周期性變化，兩組患者正常內膜、異位內膜腺上皮細胞iNOS組織學評分比較注:*與肌瘤組正常內膜比較，P>0.05，▲與在位內膜比較，P<0.05，△與同組增殖期比較P>0.05

2.2 腺肌病組在位內膜與異位內膜iNOS組織學評分比較 腺肌病組增殖期或分泌期異位內膜腺上皮細胞iNOS組織學評分均較在位內膜顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P<0.05)。異位內膜、在位內膜及正常內膜各組內增殖期和分泌期比較均無明顯差別，即無周期性變化。兩者比較差異無顯著性(P>0.05)。

2.3 腺肌病組與肌瘤組血管平滑肌iNOS組織學評分比較 腺肌病組血管平滑肌細胞iNOS組織學評分(8.6±1.3)較肌瘤組血管平滑肌細胞iNOS組織學評分(3.5±1.4)顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P<0.05)。

3、討論

內源性NO是由一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)以L 精氨酸為底物，在還原型輔酶Ⅱ(NADPH)存在下生成，催化該反應的NOS有兩種同工酶，即結構型NOS(constitutiveNOS,cNOS)和誘生型NOS(inducibleNOS,iNOS),前者合成的NO含量很小，主要參與人體的正常生理活動，主要存在與內皮細胞，神經原細胞，腎上腺皮質細胞和血小板等。機體內iNOS催化產生大量NO主要參與機體的病理生理過程，本研究結果顯示，腺肌病患者在位子宮內膜與子宮肌瘤患者子宮內膜iNOS的表達強度無明顯差異，均無周期性變化。腺肌病患者異位內膜iNOS的表達強度顯著高于其在位內膜。另外Schindl等^①研究發現在子宮腺肌病中，在位內膜微血管密度與正常內膜間無差異，而異位內膜則高于在位內膜和正常內膜，且在月經周期中無改變，與本研究結果一致，說明子宮內膜在侵入子宮肌層后，血管生成活性增強。

另外本研究結果顯示，在腺肌病組，血管平滑肌iNOS表達強度高于肌瘤組，表明NO還通過血管擴張作用，增加血流量，為異位內膜種植提供條件。子宮內膜異位種植后，由于生理特性的改變^③，可通過自分泌細胞因子誘導iNOS產生增強而調節NO的合成。楊丹等^④的實驗結果提示，雌激素與ER結合后，可能通過增加血管平滑肌細胞的iNOS的活性和蛋白的表達，促進其生成和釋放NO增加。另外，NO可誘導內皮細胞的分裂、增生，調節血管形成為異位內膜的形成創造條件。沒有NO，生長中的腫瘤大小會因血供缺乏而受到限制^⑤，也從另一方面提示了血管生成在腺肌病中的重要作用。總之，在腺肌病的發病過程中，異位內膜iNOS的高表達，致使NO合成量增加，血管擴張，并利于血管形成，增加血流量，為子宮內膜的異位種植和生長提供了有利條件。

【學習專著】 [1] Schindl M,Birner P,Obermair A,et al.Increased microvessel density in adenomyosis uteril[J].Fertil Steri1,2001,75(1):131 135. [2] 沈育紅,唐我們,喇端端.VEGF 165 在異位、在任和健康子宮頸內膜中的表達方式[J].我們微循環法,2004,8(10):304 306. [3] 汪玉寶,曹斌融,杜心谷.女性子宮廷之子宮異位癥的研究分析進況[J].澳大利亞中醫學中醫婦科學分績點冊,1995,24(1):88 91. [4] 楊丹,付曉東,李永,等.引誘型一氧化物氮合酶在17β 雌二醇引誘的血栓擬合肌組織期阻滯中的意義[J].人體解剖學報,2003,55(2):17 22. [5] Ambs S,Bennet WP,Meriam WG,et al.Frequent nitric oxide synthase 2 expression in human colon adenomas:implication for tumor angiogenesis and colon cancer progression[J].Cancer Res,1998,58:334 341.